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細胞的活性鑒定在生物學和醫(yī)學上具有很重要的意義。它是體外細胞培養(yǎng)技術(shù)中常用的一個檢測指標。不同的細胞活性鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機理，但無論采用哪種方法，都利用了死細胞和活細胞在生理機能和性質(zhì)上的差異。常用的方法有直接染色法，克隆形成試驗，比色法等。下面我們就簡單的了解一下常用的細胞活性檢測方法的原理，特點，以及各自的優(yōu)缺點。一、染色計數(shù)法化學染色法染色計數(shù)法是細胞培養(yǎng)中檢查細胞死活zui常用的方法,直接利用死細胞和活細胞對染料的不同親和力,檢查細胞活性,能在光學顯微鏡下...

蛋白定量是生物學研究中不可能或缺的一個步驟，根據(jù)其目的可分為蛋白質(zhì)的“總定量”和特定蛋白的“個別定量”。在蛋白質(zhì)的提取、純化和分析過程中，蛋白質(zhì)的定量隨處可見。比如在裂解細胞之后，應(yīng)對各個樣品中的蛋白進行定量，確保下游實驗的數(shù)據(jù)平行度；在電泳之前進行定量，保證上樣量一致，這樣目的條帶含量的變化才有說服力。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)復(fù)雜、功能各一、分子量存在巨大差異，目前還沒有一個理想且通用的蛋白定分析方法。如今最常見的方法主要有以下幾種：BCA法測定bicinchoninincacid01...

即使蛋白酶對細胞功能很重要，但你也有不想見到它們的時候。比如，在純化蛋白質(zhì)的時候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標蛋白吧，特別是低豐度蛋白。如今，市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時停止蛋白酶的活性。為了對付細胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前，主要有四種類型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對一種蛋白酶，也可以是廣譜的。人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白...

1.什么是感受態(tài)細胞（1）感受態(tài)細胞其實是一種暫時性改變一下細胞膜的通透性，以利于外源DNA（如質(zhì)粒）進入細胞。這樣的活細胞稱為感受態(tài)細胞。（2）主要原理其實就是通過特殊的方法處理使細胞，使細胞膜的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源DNA（如重組質(zhì)粒或者運載體）進入感受態(tài)的細胞。2.感受態(tài)細胞制備原理在基因克隆技術(shù)中，轉(zhuǎn)化特指將質(zhì)粒DNA或以其為載體構(gòu)建的重組DNA導入細菌體內(nèi)，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)...

01電泳的發(fā)展簡史1809國外物理學家Рейсе發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1909將膠體離子在電場中的移動稱為電泳1937創(chuàng)造了Tiselius電泳儀，建立了研究蛋白質(zhì)的移動界面電泳方法，并證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的。1948Wieland和Fischer重新發(fā)展了以濾紙作為支持介質(zhì)的電泳方法，對氨基酸的分離進行過研究。1950Durrum用紙電泳進行了各種蛋白質(zhì)的分離以后，開創(chuàng)了利用各種固體物質(zhì)(如各種濾紙、醋酸纖維素薄膜、瓊脂凝膠、淀粉凝膠等)作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳方...

對一個實驗室新手來講，提到ChIP，您可能沒聽過這個詞，他的全稱叫染色質(zhì)免疫沉淀(ChromatinImmunoprecipitation),今天就帶大家來學習一下CHIP實驗的相關(guān)知識，咱們主要從CHIP的定義、原理、步驟以及應(yīng)用以下幾點給大家分析介紹，希望能幫助大家更好的做CHIP實驗什么叫ChIP？染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）用于分析基因組中特定染色體區(qū)域中組蛋白乙?；癄顟B(tài)的實驗方法，被用來研究細胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用。是目前確定與特定蛋白結(jié)合的基因組區(qū)域或確定與特定...

上面這張圖，大家有沒有一種熟悉的感覺，沒錯，就是你想的核酸提取實驗流程圖。相信大家作剛開始做為實驗小白，剛進實驗室時，學的第一個實驗就是提質(zhì)粒了。當時剛進實驗室，看著師兄做實驗的樣子好酷呀！跟在師兄后面，認真的對每一步的步驟都做好筆記，后來才發(fā)現(xiàn)你只不過是做了一份手抄版的說明書。接下來的N年里，除了轉(zhuǎn)化、涂板、挑單克隆、搖菌、提質(zhì)粒、酶切、連接，此時此刻，只想有個提取質(zhì)粒的機器人。因為做多了之后，你就會像個機器人一樣，最后甚至連提取的原理都會遺忘了。所以，今天小編就來給大家講...

一、細胞凋亡的形態(tài)學檢測根據(jù)凋亡細胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學檢測方法。1光學顯微鏡和倒置顯微鏡2熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡3透射電子顯微鏡觀察二、磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV法）磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親...

各位小伙伴們，我們又見面了好久沒有更新一些技術(shù)性的文章了，今天我們就來講講蛋白質(zhì)技術(shù)，對，沒錯，就是Western免疫印跡，這個實驗相信各位小伙伴們，也是耳熟能詳了，但是呢，還是有不少下伙伴們在實驗過程中，會出現(xiàn)各種各樣的問題，所以為了解惑各位小伙伴們，今天我們就出一期關(guān)于Western免疫印跡實驗的知識點，其中包括它的概念、原理、應(yīng)用場景、操作步驟以及注意事項等。Western免疫印跡是什么Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進...

大家在養(yǎng)細胞的時候，想必大家也一定遇到過細胞狀態(tài)差這種情況，但是細胞狀態(tài)差，有很多種原因造成？細胞狀態(tài)很差，常常出現(xiàn)的現(xiàn)象是：細胞邊緣不清晰、細胞不飽滿、折光性差、背景比較臟、黑點很多、細胞碎片多（細胞凋亡后的細胞碎片）、單個細胞內(nèi)有空泡（凋亡）且空泡比較多；如果細胞出現(xiàn)老化，也就是細胞比較扁平、增殖減緩、細胞核體積增大、細胞突觸變多，此時觀察到的細胞狀態(tài)也是不正常的。所以，除了考慮血清和細菌污染的問題，細胞老化也不容忽視~首先，我們要知道什么是細胞老化？何為細胞老化？188...