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瀏覽次數(shù)：1346各位小伙伴們，我們又見面了
好久沒有更新一些技術性的文章了，今天我們就來講講蛋白質(zhì)技術，對，沒錯，就是Western免疫印跡，這個實驗相信各位小伙伴們，也是耳熟能詳了，但是呢，還是有不少下伙伴們在實驗過程中，會出現(xiàn)各種各樣的問題，所以為了解惑各位小伙伴們，今天我們就出一期關于Western免疫印跡實驗的知識點，其中包括它的概念、原理、應用場景、操作步驟以及注意事項等。
Western免疫印跡是什么
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。
Western免疫印跡原理
與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，探針是抗體，顯色用標記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。
Western免疫印跡應用場景
■ 從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標蛋白質(zhì)；
■ 定量或定性確定細胞或組織中蛋白質(zhì)的表達情況；
■ 用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。
Western免疫印跡操作步驟
Western操作步驟一共分為八大步驟，在這里呢，我就簡單向大家介紹大致的步驟，為了出于嚴謹性，我們將在下一期為大家專門介紹操作步驟的詳細介紹。
八大步驟：
一、試劑的準備
二、蛋白樣品制備
三、 蛋白含量的測定
四、SDS－PAGE電泳
五、轉(zhuǎn)膜
六、免疫反應
七、化學發(fā)光，顯影，定影
八、凝膠圖象分析
Western免疫印跡注意事項
1. 一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過預實驗確定最佳條件。
2. 顯色液必須新鮮配置使用，最后加入H2O2。
3. DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細
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