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2017-06-06 2016-09-30 2017-05-31 產(chǎn)品展示/ Product display
伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
產(chǎn)品型號(hào)：50次廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時(shí)間：2020-07-20訪 問 量：554
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | XY-0021 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 一周 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 放這段不 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
Actinobacillus actinomycetemcomitans
產(chǎn)品及特點(diǎn)
伴放線放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)是一種革蘭陰性的球桿菌，該細(xì)菌可以引起一些嚴(yán)重的全身感染，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)該細(xì)菌還可能引起其他疾病,如心內(nèi)膜炎、心包炎、肺炎、菌血癥、敗血癥、骨髓炎、皮膚感染、尿路感染及各種膿腫等，此外，它還能產(chǎn)生如白細(xì)胞毒素、脂多糖、趨化抑制因子等多種毒力因子,這些毒力因子有利于細(xì)菌在宿主體內(nèi)定植、破壞組織、抑制組織修復(fù)、干擾宿主免疫反應(yīng)等，因此快速檢測(cè)伴放線放線桿菌具有重要意義。熒光定量PCR是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)伴放線放線桿菌的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1.開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 特異性高，引物是根據(jù)人伴放線放線桿菌高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)擴(kuò)增其他細(xì)菌
3.引物和擴(kuò)增體系經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性比常規(guī)PCR高100倍。
4.提供無傳染性的PCR陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
5.一管式操作，熒光PCR檢測(cè)，不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，本試劑盒足夠50次20μL體系的PCR。
伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 0.5 mL（棕色） |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
試劑三 | 伴放線放線桿菌 PCR 引物混合液 | 100 μL（白蓋） |
試劑四 | 伴放線放線桿菌 PCR 陽性對(duì)照 (1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL（紅蓋） |
試劑五 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20次（1mL，綠蓋） |
試劑六 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 樣品DNA。
使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供無傳染性的DNA段作為陽性對(duì)照。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3.在7號(hào)管中加入5 μL 陽性對(duì)照（其濃度為1×10E8拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7.用自選方法純化樣品的DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有N個(gè)樣品，則需要進(jìn)行N+2個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免DNA提取的天凈沙核酸釋放劑試用裝，該釋放劑的裂解液可以直接作為PCR模板，省略了DNA提取步驟
9.如果進(jìn)行定量分析，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做定性分析，則6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個(gè)做（可以選4號(hào)，其余樣品不變）。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分：
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
伴放線放線桿菌 PCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2個(gè)待測(cè)樣品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 自備超純水 | 不加 | 6 μL | 不加 |
第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液（2-7 號(hào)） | 不加 | 不加 | 各 6μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…） |
11.蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR（具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。
四、熒光定量PCR反應(yīng)參數(shù)
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min |
PCR 反應(yīng) （40個(gè)循環(huán)） | 94℃ | 0.5 min |
50℃ | 0.5 min（采集 SYBR 通道的 熒光信號(hào)） | |
72℃ | 0.5 min | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
四、數(shù)據(jù)處理
12.設(shè)定60℃-96℃范圍的融解曲線分析，排除假陽性。
13. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度
14. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性，如果小于 40，則為陽性。
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