牛赤羽病毒RT-PCR試劑盒

牛赤羽病毒RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

產(chǎn)品型號：50次
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時間：2020-07-21
訪問量：598

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詳細(xì)介紹

品牌	其他品牌	貨號	XY-0040
規(guī)格	50T	供貨周期	一周
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁

牛赤羽病毒RT-PCR試劑盒

Akabane Disease Virus(AKAV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

牛赤羽病毒(Akabane Virus，AKAV) 會引起赤羽病，又稱阿卡班病，是牛、羊的一種以流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎兒畸形、木乃伊、新生胎兒發(fā)生關(guān)節(jié)彎曲積水性無腦綜合癥為特征的病毒性傳染病。特征性的表現(xiàn)是妊娠牛異常分娩，多發(fā)生于懷孕 7 個月以上或接近妊娠期滿的牛。感染初期胎齡越大的胎兒早產(chǎn)發(fā)生的越多，中期發(fā)生難產(chǎn)，即使順產(chǎn)，新生犢也不能站立。后期多產(chǎn)出無生活能力的犢牛或瞎眼的犢牛。該病毒會給養(yǎng)殖業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測牛赤羽病病毒。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)牛赤羽病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

牛赤羽病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（藍(lán)蓋）
試劑四	牛赤羽病病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	牛赤羽病病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL，綠蓋）
試劑七	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?nbsp;

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 牛赤羽病毒 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各4 μL	4 μL	4 μL
牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	12.5 μL	不加	不加
超純水	不加	12.5 μL	不加
牛赤羽病病毒 RT-PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液	不加	不加	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	60 分鐘
預(yù)變性	95℃	5 分鐘
PCR 反應(yīng) （35個循環(huán)）	95℃	30 秒
	58℃	30 秒
	72℃	30 秒
延伸	72℃	10 分鐘

5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長度為 720bp。如果陰性對照有此擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對照有此擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有此擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。

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