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2015-03-04 2015-07-13 2015-05-29 2017-03-14 2015-04-29 產(chǎn)品展示/ Product display
交鏈孢霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
產(chǎn)品型號：50次廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時間：2020-07-21訪 問 量：614
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | XY-0046 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 一周 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
交鏈孢霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒
Alternaria spp.
產(chǎn)品及特點
交鏈孢霉屬是土壤、空氣、工業(yè)材料上常見的腐生菌，屬于半知菌類，叢梗孢目， 暗色孢科，磚隔孢亞科。分布主要是在植物的葉子、種子和枯草上也常見到，有的是 栽培植物的寄生菌。菌絲暗至黑色，有隔膜，以分生孢子進行無性繁殖。分生孢子梗 較短，單生或叢生，大多數(shù)不分枝，與營養(yǎng)菌絲幾乎無區(qū)別。本公司開發(fā)交鏈孢霉屬 通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物根據(jù)交鏈孢霉屬通用專一區(qū)設(shè)計，特異性高。
3. 熒光定量 PCR 檢測，比常規(guī) PCR 更加靈敏。
4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
交鏈孢霉屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 0.5 mL（棕色） |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
試劑三 | 交鏈孢霉屬通用染料法 qPCR 引物混 合液 | 100 μL（白蓋） |
試劑四 | 交鏈孢霉屬通用染料法 qPCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL | 50 μL（黃蓋） |
試劑五 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于陽性對照濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千 萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病 原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽 性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分 震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
8. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）， 一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原 液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此 稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加 上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取 決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡Ｖ苽渌贸蔀闃悠?DNA。
9. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進行）
10. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上 步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性 分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用 第 4 號陽性對照稀釋液，濃度為 14810 拷貝/μL）。下面只描述定量分析的步驟， 定性分析只是把 6 個標(biāo)曲反應(yīng)縮減成 1 個，其余不變。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | PCR 陽性 對照管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
交鏈孢霉屬通用染料法 qPCR 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 個待測樣品 DNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 自備超純水 | 不加 | 6 μL | 不加 |
第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液（2-7 號） | 不加 | 不加 | 各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…） |
12. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化）。
過程 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min，（采集 SYBR 通道的熒光信號） |
按儀器預(yù)設(shè)程序進行熔解曲線分析
四、數(shù)據(jù)處理
13. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 cDNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
14. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 36。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 36 則為陰性，如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-36 之間，則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值小于 36，擴增曲線有 明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。
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