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2015-03-04 2015-07-13 2015-05-29 2017-03-14 2015-04-29 產(chǎn)品展示/ Product display
黑曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
產(chǎn)品型號(hào)：50次廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時(shí)間：2020-07-22訪 問 量：552
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | XY-0054 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 一周 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
黑曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒
Aspergillus niger
產(chǎn)品及特點(diǎn)
黑曲霉，半知菌亞門，絲孢綱，絲孢目，叢梗孢科，曲霉屬真菌中的一個(gè)常 見種。廣泛分布于世界各地的糧食、植物性產(chǎn)品和土壤中。是重要的發(fā)酵工業(yè)菌 種，可生產(chǎn)淀粉酶、酸性蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶、檸檬酸、 葡糖酸和沒食子酸等。有的菌株還可將羥基孕甾酮轉(zhuǎn)化為雄烯。生長適溫 28℃ 左右，低相對(duì)濕度為 88%，能引致水分較高的糧食霉變和其他工業(yè)器材霉變。 本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)黑曲霉的試劑盒， 它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)非洲馬瘟病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
黑曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500 μL（本色蓋） |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL（亮黃蓋） |
試劑三 | 黑曲霉探針法 qPCR 引物混合 液 | 100 μL（白蓋） |
試劑四 | 黑曲霉 qPCR 探針 | 50 μL（棕色管） |
| 試劑五 | 黑曲霉探針法 qPCR 陽性對(duì)照 2.0(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL（黃蓋） |
試劑六 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原， 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 模板稀釋液，用帶芯槍 頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品，設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性 對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用 水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模 板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（2-7 管） |
2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
黑曲霉 qPCR 探針 | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 黑曲霉探針法 qPCR 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 個(gè)待測(cè)樣品 DNA 模板 | 7 μL |
|
|
| 超純水 | 7 μL | ||
| 第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 （2-7 號(hào)） | 各7 μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…） |
11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
qRT-PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15sec |
| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的熒光信號(hào)） |
四、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值 為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值小于 40，擴(kuò)增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。
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