隱孢子蟲通用PCR試劑盒

Cryptosporidium spp.

產(chǎn)品及特點

隱孢子蟲(Cryptosporidium spp.)為體積微小的球蟲類寄生蟲。廣泛存在 多種脊椎動物體內(nèi)，寄生于人和大多數(shù)哺乳動物的主要為微小隱孢子蟲，由微 小隱孢子蟲引起的疾病稱隱孢子蟲病，是一種以腹瀉為主要臨床表現(xiàn)的人畜共 患性原蟲病。病程可遷延數(shù)月至 1 年。病人常并發(fā)腸外器官隱孢子蟲病，如呼 吸道和膽道感染，使得病情更為嚴(yán)重復(fù)雜。隱孢子蟲感染常為 AIDS 病人并發(fā) 腹瀉而死亡的原因。因此快速準(zhǔn)確診斷隱孢子蟲具有重要意義。為此本公司基 于 PCR 原理開發(fā)了本產(chǎn)品，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供寄生蟲 DNA 模板。

2. 根據(jù)隱孢子蟲保守序列設(shè)計的專一性引物，與其他微生物無交叉反應(yīng)

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

隱孢子蟲通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一 個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。